Facteurs de risque et prévention primaire de la maladie de Chagas congénitale dans un pays non endémique

Contexte Dans cette étude de cohorte longitudinale, nous avons évalué la transmission congénitale de la maladie de Chagas dans une zone non endémique. Le but de ce travail était d’analyser la valeur prédictive d’une réaction en chaîne de la polymérase Trypanosoma cruzi-positive. Etude de l’utilisation de la PCR comme outil de détection précoce des méthodes d’infection. Les descendants des mères enceintes séropositives ont été suivis. Le statut parasitologique des mères a été étudié par PCR dans un total de grossesses; Soixante-cinq nouveau-nés, dont une paire de jumeaux, ont été suivis par PCR et sérologie en cas de transmission congénitale, l’hémoculture et le typage de la lignée parasitaire ont été pratiqués. Résultats: Neuf nourrissons avaient contracté une MC congénitale Cela représente un taux de transmission de% parmi les mères séropositives infectées nouveau-nés de toutes les naissances vivantes Tous les nourrissons ont été infectés par T cruzi unité de typage discrète V souche Une corrélation statistiquement significative a été trouvée entre la transmission verticale T cruzi et un résultat PCR positif pendant la grossesse%; nouveau-nés infectés nés vivants Aucun nouveau-né infecté n’a été détecté chez les mères traitées avant leur grossesse, comparé au% des naissances vivantes chez les mères non traitées. Conclusions La PCR est un outil utile pour détecter la MC congénitale et le traitement des femmes infectées en âge de procréer semble être utile pour empêcher la transmission verticale

congénitale, Chagas, Trypanosoma cruzi, traitement, préventionLa maladie de Chagas CD est une zoonose parasitaire causée par T cruzi et est endémique dans les pays d’Amérique latine Elle affecte des millions de personnes dans le monde Le parasite est transmis par les fèces d’une triatomine infectée par transfusion sanguine ou transplantation d’organes, congénitalement , et par ingestion orale d’aliments ou de boissons contaminés CD est également un problème de santé dans les pays non endémiques où il y a un afflux d’immigrants en provenance de zones endémiques Le taux de transmission congénitale rapporté dans les pays d’Amérique latine varie de% à% Plusieurs cas congénitaux ont été signalés dans les pays non endémiques , bien que la transmission du cruzi dans le sang et les organes ait été réalisée en Espagne et dans d’autres pays européens. l’absence de dépistage obligatoire et le fait que la plupart des nouveau-nés infectés sont asymptomatiques signifie que son incidence est inconnue Diagnostic de congénitale l Les infections sont basées sur des techniques parasitologiques et sérologiques Le traitement étiologique des nouveau-nés infectés congénitalement est efficace ; néanmoins, il faut commencer le plus tôt possible pour éviter la progression vers la phase chronique de la maladie Le traitement des femmes infectées en âge de procréer a également été proposé comme moyen d’interrompre la transmission de la maladie . Le plus grand nombre d’immigrants d’Amérique latine Les femmes latino-américaines en âge de procréer représentent% de la population en âge de procréer à Murcia Parmi celles-ci,% viennent de Bolivie, un pays où les taux de transmission verticale sont élevés étude nous avons analysé des échantillons de sang de femmes enceintes avec CD chronique et leur progéniture pour évaluer le taux d’infection congénitale dans une zone non endémique et pour évaluer les facteurs de risque et les souches de parasites impliqués dans la transmission verticale

Méthodes

Sujets et collecte de données

Les patients ont subi un test de diagnostic sérologique de la MC et ont été cliniquement caractérisés, traités et suivis cliniquement après le traitement à l’Hôpital Virgen de la Arrixaca, Murcie, Espagne, de janvier à décembre. Un total de femmes enceintes séropositives a été inclus dans cette étude. venus de Bolivie femmes; % et femmes du Paraguay; % et varié âge des années moyen ± écart-type, ± ans Le diagnostic de l’infection à T cruzi chez les mères a été faite en utilisant des tests sérologiques effectués avec différents antigènes – le test d’immunofluorescence indirecte Inmunofluor Chagas; Biocientifica et le dosage immuno-enzymatique T-test ELISA système T cruzi; Les mères ayant des résultats positifs pour les deux tests sérologiques ont été considérées infectées par T cruzi La présence de parasites chez les mères et les nouveau-nés a été dosée par amplification en chaîne par polymérase amplification par PCR de l’ADN minuscule du kinétoplaste du T cruzi dans le sang périphérique. infections congénitales, sérologie et PCR ont été réalisées à -,, et mois de vie L’infection congénitale était considérée lorsque les parasites étaient détectés par PCR et / ou hémoculture à tout âge ou lorsque les résultats sérologiques restaient positifs à des mois de vie Le taux « a été défini comme le nombre d’infections congénitales divisé par le nombre total de naissances vivantes. Les nouveau-nés ont été examinés pour évaluer les manifestations cliniques liées aux CD congénitales symptomatiques. Ainsi, présence de lésions cutanées, signes neurologiques, symptômes du syndrome de détresse respiratoire, et les troubles digestifs tels que l’hépatosplénomégalie étaient un nalyzed

Benznidazole traitement

Les nourrissons et les mères ont été traités par voie orale au benznidazole, à raison de mg / kg de poids corporel par jour chez les nouveau-nés et de mg fois par jour chez les femmes pendant plusieurs jours sérologie et PCR ont été effectuées au moment du diagnostic. guéri lorsque les résultats sérologiques conventionnels étaient négatifs dans des tests successifs

Extraction d’ADN et amplification par PCR en minicircle de kinétoplaste

Des échantillons de sang périphérique ont été prélevés chez des femmes et des nourrissons infectés par T cruzi ou mL, respectivement, l’extraction de l’ADN et la détection par PCR des régions variables de la paire -base du génome de la minicircle T cruzi kinetoplast ont été réalisées comme décrit par Murcia et coll.

Culture parasitaire

Du sang périphérique total de nouveau-nés a été incubé dans du milieu tryptone pour perfusion hépatique / milieu biphasique Novy-MacNeal-Nicolle, additionné de% de sérum foetal de veau inactivé par la chaleur à ° C et examiné chaque semaine au microscope pour visualiser les parasites

Purification de l’ADN génomique

Les parasites isolés des nouveau-nés de l’étude ont été cultivés, recueillis par centrifugation à t / min pendant quelques minutes à température ambiante, et lavés deux fois avec du sérum physiologique tamponné au phosphate. Les pastilles de parasite ont été remises en suspension dans du tampon de lyse mmol / L Tris-acide chlorhydrique On a ensuite ajouté de l’acide éthylènediaminetétraacétique L, du mmol / L de chlorure de sodium, du dodécylsulfate de sodium et on a digéré pendant des minutes à ° C en présence de mg / ml de RNAse A Roche Diagnostics Proteinase K Roche Diagnostics incubation à ° C pendant quelques minutes, avec inversion régulière La concentration et l’intégrité de l’ADN génomique ont été déterminées au moyen d’une électrophorèse sur gel d’agarose et d’une détection spectrophotométrique à l’aide d’un spectrophotomètre NanoDrop Thermo Scientific

Amplifications PCR pour l’identification des unités de frappe discrètes

L’identification de la lignée du parasite isolé de nouveau-nés infectés congénitalement a été dosée par PCR du mini-exon, du fragment Ae et des gènes S et S. L’amplification PCR de l’ARN ribosomique de mini-exon et Sα a été réalisée comme décrit par Brisse. et ses collègues La PCR pour l’amplification du domaine de taille variable de la séquence S rRNA a été réalisée comme décrit par Clark et ses collègues L’amplification du fragment Ae a été réalisée par PCR, comme décrit par Brisse et ses collègues

Analyses statistiques

Le test was a été utilisé pour comparer les variables qualitatives. Les relations ont été jugées significatives à P & lt; Tous les tests statistiques ont été réalisés avec le logiciel SPSS

Considérations éthiques

L’étude a été examinée et approuvée par le Comité d’éthique de l’Hôpital Virgen de la Arrixaca Le consentement éclairé écrit a été obtenu de tous les patients inscrits à l’étude

RÉSULTATS

Transmission congénitale chez les nouveau-nés

Un total de femmes enceintes séropositives a été inclus dans l’étude Nous avons observé la naissance de jumeaux, et les mères sont tombées enceintes deux fois pendant la période d’étude. Diagnostic et suivi des nourrissons Neuf nouveau-nés ont contracté la maladie congénitale Ainsi, parmi les mères séropositives, le taux de transmission congénitale était% nouveau-nés infectés de naissances vivantes Tous les enfants infectés sont nés de mères boliviennesSix des bébés infectés congénitalement sont nés à terme et ne présentaient aucune manifestation clinique de MC congénitale symptomatique Les autres étaient symptomatiques poids à la naissance, distension abdominale avec hépatosplénomégalie, signes d’ictère et myocardite avec signes d’insuffisance cardiaque et de détresse respiratoire. Le frère jumeau n’a pas subi la même évolution clinique sévère mais a eu un faible poids à la naissance et une splénomégalie. respectivement à et minutes, faible poids à la naissance, di stension avec hépatosplénomégalie, lésion purpurique, insuffisance cardiaque, hypertension pulmonaire sévère et détresse respiratoire

Suivi diagnostique

L’ADN de T cruzi a été détecté par PCR dans la circulation sanguine des nourrissons infectés, confirmant la transmission verticale de ces nourrissons, a eu un résultat de PCR positif dans leurs premiers mois de vie; dans l ‘autre, parce que les prélèvements de sang n’ont pas été effectués à la naissance, le diagnostic par PCR a été effectué à l’ âge de quelques mois. Le parasite a été isolé par hémoculture chez les nourrissons avec une infection diagnostiquée par PCR à l ‘âge de plusieurs mois. diagnostic à mois La culture était également positive chez le nourrisson qui avait à la fois des résultats sérologiques et PCR positifs à des mois d’âge Tableau

Tableau Diagnostic du suivi par croissance parasitaire, sérologie et réaction en chaîne de la polymérase chez les nourrissons atteints de la maladie de Chagas congénitale Âge du nourrisson au diagnostic, mois Parasite Croissance Diagnostic Âge – Mois Âge Mois Âge Mois Âge IFI ELISA PCR IFI ELISA PCR IFI ELISA PCR IFI ELISA PCR Oui ND Oui ND Oui Oui ND ND ND Oui ND ND ND ND ND ND ND ND Infant Âge au diagnostic, Mois Parasite Croissance Diagnostic Suivi Âge – Mois Age Mois Age Mois Age Mois ELISA IFI PCR IFI ELISA PCR IFI ELISA PCR IFI ELISA PCR Oui ND Oui ND Oui Oui ND ND ND ND ND ND Oui ND ND Oui ND ND ND signes plus positifs indiquent resultsAbbreviations: ELISA, le dosage immuno-enzymatique; IFI, dosage par immunofluorescence indirecte; ND, pas fait; PCR, amplification en chaîne par polyméraseVoir les grands nourrissons non infectés, tous ont eu des résultats PCR négatifs tout au long du suivi diagnostique, et les résultats sérologiques négatifs à l’âge et / ou aux mois éliminés T cruzi infection

Typage de parasites isolés de nouveau-nés infectés de façon congénitale

L’analyse des produits d’amplification par PCR de l’espaceur non transcrit des gènes mini-exon a montré une bande spécifique d’unités de typage discrètes T cruzi DTU II, III, IV, V et VI, et l’analyse du domaine variable de taille du S La séquence d’ARNr a identifié les parasites comme appartenant à T cruzi DTU II, III ou V Les produits d’amplification PCR du domaine divergent D de l’ARNr Sα ont montré qu’ils appartenaient à T cruzi DTU V En outre, l’amplification PCR du fragment Ae a confirmé que tous les nouveau-nés ont été infectés par une souche T cruzi DTU V

Suivi du traitement des nourrissons congénitalement infectés

Tous les nouveau-nés ont montré une bonne tolérance au benznidazole. Aucun effet secondaire n’a été observé et tous les cas ont été guéris. Les résultats de la PCR sont devenus négatifs chez les nourrissons qui avaient résultats initialement positifs et demeurés négatifs jusqu’à la fin du suivi Un nouveau-né chez qui le traitement n’a pas été administré correctement a eu un résultat PCR négatif à quelques jours et un résultat positif à quelques jours. Par conséquent, le traitement devait être soigneusement supervisé pour assurer l’administration complète. Bien sûr, les résultats de PCR subséquents ont été négatifs tout au long du suivi post-traitement, ce qui était considéré comme une indication de la guérison.

Tableau Suivi sérologique et post-thérapeutique de la réaction en chaîne de la polymérase chez les nourrissons atteints de la maladie de Chagas congénitale Jours de l’enfant après traitement Jours après traitement Après traitement IFI ELISA PCR IFI ELISA PCR IFI ELISA PCR – – – – – CM CM CM ND ND – – – ND ND – – – – CM CM CM – – ND – – – – – – ND ND – – – – – – ND a – a – – CM CM CM – – – – – – ND ND ND ND ND – – – – – Jours de nourrisson après traitement Jours après traitement Jours après traitement IFI ELISA PCR IFI ELISA PCR IFI ELISA PCR – – – – CM CM CM ND ND ND ND ND CM CM CM ND ND – – – – – ND ND – – – – – – ND a – a – – CM CM CM – – – – – – ND ND ND ND ND – – – – – Les signes plus indiquent des résultats positifs; signes moins indiquent des résultats négatifsAbbreviations: CM, surveillance continue; ELISA, dosage immuno-enzymatique; IFI, dosage par immunofluorescence indirecte; ND, pas fait; PCR, amplification en chaîne par polymérase Patient a été suivi deux fois après son premier traitement L’échec du traitement a été diagnostiqué sur la base d’un résultat de PCR positif au bout de plusieurs jours, et un second traitement et un suivi post-traitement ont été effectués.

Traitement des femmes infectées pour prévenir la transmission verticale

Dix des femmes enceintes ont eu leur infection diagnostiquée avant d’être enceintes. Par conséquent, elles avaient été traitées pour une MC avant l’étude Aucune de leur progéniture n’est née infectée. Le suivi de la PCR et les délais entre le traitement et la grossesse sont indiqués dans le tableau.

Tableau Réaction en chaîne de la polymérase Suivi des mères précédemment traitées Résultats PCR Durée après traitement Mère avant traitement Fin du traitement Jours Année Années Années – -a -a – -a – -a – -a – -a – – -a – – – a – – – -a – – – – -a PCR Résultats Durée après traitement Mère avant traitement Fin du traitement Jours Année Années Années – -a -a – -a – -a – -a – -a – – -a – – -a – – – -a – – – – -a Les signes positifs indiquent des résultats positifs; Les signes négatifs indiquent des résultats négatifs. Abréviation: PCR, réaction en chaîne de la polymérase. Test pendant le suivi du moment où la mère est devenue enceinte.Vérifier.Interéressant, la mère non traitée a donné naissance à un nourrisson infecté et, après que son infection a été diagnostiquée et traitée, en a En comparaison avec le taux de transmission congénitale chez les mères traitées, qui était de%, le taux chez les mères non traitées était de%, parce que les nourrissons étaient infectés, par rapport au nombre total de naissances vivantes. leur progéniture Cependant, probablement en raison du petit nombre de mères traitées dans notre étude, il n’y avait pas de corrélation statistiquement significative entre le traitement des femmes infectées et la prévention de la transmission verticale P =; test de Fisher

Figure Vue largeDownload slide Comparaison de la transmission verticale et de la réaction en chaîne de la polymérase La PCR donne des résultats chez les mères infectées traitées et non traitées Une mère était enceinte deux fois, avant et après le traitement; elle a transmis l’infection avant d’être traitée. Une des mères non traitées avec des résultats de PCR positifs a donné naissance à des jumeaux, tous deux infectés. Abréviation: PCR, réaction en chaîne de la polyméraseFigure View largeTélécharger la lameComparaison de la transmission verticale et de la réaction en chaîne par polymérase mères infectées Une mère était enceinte deux fois, avant et après le traitement; elle a transmis l’infection avant d’être traitée. Une des mères non traitées avec des résultats de PCR positifs a donné naissance à des jumeaux, tous deux étant infectés. Abréviation: PCR, amplification en chaîne par polymérase

La PCR comme outil pronostique pour la transmission congénitale du CD

Le statut parasitologique a été étudié par PCR dans un total de grossesses, parmi lesquelles les mères traitées précédemment Parmi les femmes non traitées, les cas ont un résultat PCR positif Huit mères avec un résultat PCR positif ont transmis les nourrissons parasités congénitalement infectés, dont une paire de jumeaux , ce qui représente un% de transmission congénitale chez les mères avec un résultat positif à la PCR chez les nouveau-nés infectés en naissance vivante et aucune transmission congénitale chez les mères avec un résultat négatif à la PCR aucun nouveau-né infecté dans les naissances vivantes Figure Les résultats de la PCR étaient négatifs pour toutes les mères ayant été traitées avant la grossesse et aucune d’elles ne transmettait l’infection à leur progéniture. De plus, chez les mères transmetteuses avec un résultat PCR positif, les résultats de PCR devenaient négatifs après traitement et restaient négatifs pendant une seconde. gestation dans laquelle l’infection n’a pas été transmise. y corrélation significative entre la transmission verticale de T cruzi et un résultat PCR positif pendant la grossesse P =; χ test

DISCUSSION

Dans cette étude, le taux de transmission transplacentaire était de%, ce résultat est similaire à ceux d’autres études sur des mères infectées en Bolivie, dans lesquelles une prévalence élevée d’infection à T cruzi et un taux élevé de transmission congénitale ont été signalés Le nombre de cas congénitaux diagnostiqués dans cette étude était plus élevé que celui observé dans d’autres régions espagnoles, où des taux de transmission verticale de% et% ont été signalés Cette constatation peut être attribuée au dépistage méticuleux des les mères et leurs nouveau-nés dans cette étude, ainsi que la sensibilité de la technique parasitologique utilisée, qui a permis le diagnostic des cas symptomatiques et asymptomatiques Ainsi, tous les cas congénitaux confirmés ont eu un résultat PCR positif à l’âge Par conséquent, la PCR devrait être considérée comme un outil utile pour le diagnostic précoce de l’infection à T cruzi chez les nourrissons nés de femmes séropositives. la sérologie conventionnelle n’a pas une valeur pronostique suffisante pour le diagnostic précoce de MC congénitale Néanmoins, même si un résultat PCR positif au cours des premiers mois de la vie est une indication directe de l’infection, une sérologie de suivi est essentiel lorsque les résultats sont négatifs, car un résultat PCR négatif ne signifie pas nécessairement que le parasite est absent. Il a été proposé que la PCR réalisée peu de temps après la naissance puisse amplifier l’ADN des parasites morts des mères infectées Dans notre étude, l’infection congénitale était également confirmé par la culture des parasites du sang des nourrissons avec une infection diagnostiquée à l ‘âge de mois, et des nourrissons avec un diagnostic à des mois Dans une étude précédente sur le diagnostic précoce de la MC congénitale, la sensibilité de l’ hémoculture était similaire à que dans notre étude% vs% Le typage des isolats parasitaires a montré la prédominance du DTU V chez les nouveau-nés infectés congénitalement, d’accord avec d’autres conclusions des mères boliviennes et de leur progéniture On ne sait pas si l’infection congénitale est associée à certaines lignées de T cruzi Le traitement avec les trypanocides disponibles est recommandé pour les cas congénitaux . Dans notre étude, les résultats de la PCR sont devenus négatifs plus tôt ou en même temps que les résultats sérologiques, reflétant probablement l’efficacité du traitement dans la clairance des parasites. La PCR a également confirmé l’échec thérapeutique chez les patients atteints de MC congénitale. Dans une étude précédente, la PCR est un outil sensible et spécifique pour la détection précoce de la susceptibilité du parasite au traitement . Une limitation importante de ces agents antiparasitaires est la incidence des effets indésirables L’incidence et la tolérance des effets secondaires semblent être associées à l’âge du patient [ Nous avons observé une bonne tolérance au benznidazole sans effets secondaires dans tous les cas congénitaux traités au cours de la première année de vie. Un traitement précoce augmente les chances de succès et le traitement doit donc être administré le plus tôt possible. % des cas congénitaux, un résultat qui renforce le besoin de diagnostic précoce et de traitement de l’infection congénitaleNous avons trouvé une relation statistiquement significative entre la transmission verticale et un résultat PCR positif pendant la gestation En effet, toutes les mères transmissibles étaient PCR positives. un facteur de risque pour la transmission verticale de la MC Par conséquent, le dépistage par PCR doit être réalisé chez les femmes enceintes infectées afin d’identifier a priori les mères ayant une forte probabilité de transmission de l’infection à leur progéniture. que le traitement des femmes infectées au début de la vie est un bon moyen pour éviter la MC congénitale Nous avons détecté une conversion PCR-négative chez toutes les mères devenues enceintes entre et après le traitement, indiquant à nouveau l’efficacité du traitement au benznidazole pour le nettoyage des parasites Nos données suggèrent que le traitement des femmes chroniquement infectées ne garantit pas La taille de l’échantillon était trop petite pour que nous puissions évaluer statistiquement cette transmission. Le taux de transmission verticale observé dans notre étude suggère que le fardeau réel de la MC congénitale dans les pays non endémiques pourrait être plus élevé. Cela souligne la nécessité d’un dépistage systématique de la T cruzi par PCR chez les femmes enceintes infectées et leur progéniture dans les pays non endémiques. Une relation directe entre le traitement chez les mères infectées et la prévention de la transmission verticale a été observée, suggérant que le traitement des femmes avant la grossesse empêche la transmission CD congénitale sion

Remarques

Remerciements Nous remercions A Lopez-Barajas et C Marañón Institut de Parasitología y Biomedicina López Neyra, Consejo Superior de Investigaciones Científicas pour leur assistance technique dans la culture parasitaire et la purification génomique de l’ADN Soutien financier Cette étude a été soutenue par le Réseau de recherche sur les maladies tropicales // et RD // et le projet de recherche en santé subvention PS / MCT et MCL ont également été soutenus par la subvention Junta de Andalucía P-CVI-, Plan National IDI MEC-Espagne, et FEDER subvention BFU-Conflits d’intérêts potentiels Tous auteurs: Aucun conflit signalé Tous les auteurs ont soumis le formulaire ICMJE pour la divulgation des conflits d’intérêts potentiels Conflits que les éditeurs considèrent pertinents pour le contenu du manuscrit ont été divulgués