Tropheryma whipplei Bactériémie pendant la fièvre en Afrique de l’Ouest rurale

ContexteTropheryma whipplei non seulement cause la maladie de Whipple mais aussi un pathogène émergent associé à la gastro-entérite et la pneumonie qui est fréquemment détectée dans les échantillons de selles en Afrique occidentaleNous avons étudié le rôle de T whipplei chez les patients fébriles du Sénégal rural qui avaient un résultat négatif pour le paludisme. jusqu’en juillet, nous avons mené une étude prospective dans des villages sénégalais; des échantillons de sang prélevés sur des patients fébriles ont été prélevés. L’extraction de l’ADN d’échantillons de sang total prélevés par piqûre au doigt avec un lancette a été réalisée au Sénégal; Des tests d’élution et de réaction en chaîne par polymérase ont été réalisés en France en avril. En avril, nous avons effectué un dépistage pour rechercher la présence de T whipplei dans la salive et les selles de la population générale. également analyséRésultats La présence de T Whipplei ADN a été détectée dans le sang de% des patients testés, principalement chez les enfants et en décembre et janvier. Aucun des porteurs français testé positif Les patients atteints de bactériémie T whipplei ont présenté des patients fiévreux, toux, soif, fatigue, rhinorrhée et troubles du sommeil Les troubles de la toux et du sommeil étaient significativement plus fréquents chez les porteurs fébriles que chez les épisodes fébriles sans bactériémie à T. whipplei et respectivement Aucune corrélation n’a été observée entre la présence de T whipplei dans les selles et la salive et les bactériémies. que T whipplei est un agent de la fièvre de la saison froide inexpliquée avec la toux dans les zones rurales Afrique de l’Ouest

Jusqu’à récemment, on pensait que Tropheryma whipplei était une bactérie rare causant la forme classique de la maladie de Whipple, caractérisée par des bacilles histologiquement résistants à l’acide Schiff dans les macrophages infectés du petit arc Cependant, cette entité bien connue chez les hommes blancs, ne représente qu’une manifestation clinique rare de l’infection à T. whipplei En effet, des études récentes ont montré que le spectre des infections à T. whipplei est large car cette bactérie peut provoquer des infections localisées, telles que endocardite, spondylodiscite, méningoencéphalite, uvéite, et pneumonie [,,, -] La bactérie est également très fréquente% dans les échantillons fécaux obtenus chez des enfants âgés de – ans en France qui ont une gastro-entérite mais n’ont pas été détectés dans un groupe témoin d’enfants du même âge sans diarrhée [ L’ADN de T whipplei a également été détecté dans des échantillons de selles et de salive provenant d’individus asymptomatiques, mais sa prévalence dépend de zone En Europe, la prévalence de cette bactérie dans les échantillons fécaux de la population adulte générale est estimée à% -% De plus, la bactérie a été détectée dans les eaux usées et est plus fréquente dans les échantillons fécaux % -% par rapport à la population générale Dans une étude récente,% whipplei était présent dans les échantillons de selles chez les% des enfants du Sénégal vivant en milieu rural. réaction PCR Cette recherche faisait partie d’une étude longitudinale de la relation hôte-parasite dans les villages sénégalais initiée et initialement centrée sur le paludisme et la borréliose à tiques Les améliorations dans la connaissance et la gestion de ces maladies nous ont conduit à Étendre nos études pour rechercher d’autres agents étiologiques de la fièvre Parce que T whipplei est très répandu dans les échantillons de selles humaines obtenues au Sénégal rural et est également un agent de la gastro-entérite , nous émettons d’abord l’hypothèse Ainsi, notre objectif était d’étudier le potentiel de T whipplei à provoquer une infection chez les patients avec une fièvre inconnue et un résultat de test négatif. pour le paludisme dans le Sénégal rural

Patients, matériaux et méthodes

Les participants sénégalais ont effectué des études dans la population des villages de Dielmo et de Ndiop, dans la région du Sine-Saloum au Sénégal, afin d’évaluer l’incidence de T. whipplei. Le projet Dielmo, une étude prospective longitudinale initiée dans le cadre d’une étude à long terme sur les associations hôte-parasite, a montré une population de Dielmo en proportion de sujets féminins et masculins, dont:% étaient des enfants plus jeunes. que les années, et une population de Ndiop ratio de femmes à des sujets masculins, dont:% étaient des enfants âgés de & lt; Au début de l’étude, tous les membres de la population, y compris les patients et les parents ou tuteurs légaux de tous les enfants, ont donné leur consentement éclairé au Comité national d’éthique du Sénégal et au comité éthique local de l’Institut Fédératif de Recherche Marseille a approuvé cette étude La détection des individus fiévreux était à la fois passive et active Le dispensaire créé pour le projet était ouvert tous les jours. Chaque villageois était également visité quotidiennement à domicile pour un suivi clinique. Pour les personnes présentant une fièvre définie comme une température axillaire & gt; Analyse sanguine Des échantillons de sang total ont été prélevés sur des piqûres au doigt à l’aide d’un lancette et appliqués sur des lames de microscope en verre. Des frottis épais et minces ont été colorés au Giemsa et analysés au microscope pour les trophozoïtes et les gamétocytes du paludisme. et Borrelia Si le résultat du test de paludisme était négatif, μL – gouttes de La première étape de l’extraction de l’ADN a été faite directement dans le dispensaire du village en utilisant des kits QIAamp QIAGEN Le sang total a été digéré avec la protéinase K puis la liaison et le lavage des échantillons avec les colonnes Qiagen ont été réalisés pompe Fisher Scientific Ensuite, les colonnes avec l’ADN lié et séché à l’intérieur ont été conservées à ° C avant élution finale réalisée ultérieurement à l’Unité des Rickettsies, Marseille, France Après lavage répété avec Tampon AW et incubation à température ambiante pendant min avec μL de Tampon AE, l’ADN a été élue par centrifugation à g pendant minMaster les mélanges ont été préparés en suivant les instructions du fabricant. PCR quantitative en temps réel a été réalisée en utilisant un instrument LightCycler Roche Diagnostics avec le QuantiTect Probe PCR Kit comme décrit par le fabricant. TwhiF: ‘-TTGTGTATTTGGTATTAGATGAAACAG-‘ et TwhiR: paire d’amorces ‘-CCCTACAATATGAAACAGCCTTTG-‘ la sonde spécifique TaqMan Twhi: -FAM-GGGATAGAGCAGGAGGTGTCTGTCTGG-TAMRA, comme indiqué précédemment Lorsque l’échantillon a été testé positif dans ce test, le résultat a été confirmé par une deuxième PCR quantitative utilisant le TwhiF: ‘-TGAGGATGTATCTGTGTATGGGACA-‘ et TwhiR: ‘- TCCTGTTACAAGCAGTACAAAACAAA- ‘ensemble d’amorces et la sonde Twhi: -FAM-GAGAGATGGGGTGCAGGACAGGG-TAMRA L’Acase a été définie comme une PCR quantitative positive dans des tests ciblant différentes séquences d’ADN répétées de T. whipplei La qualité de la manipulation et de l’extraction d’ADN a été vérifiée par PCR quantitative. Analyse des selles et de la salive En avril, nous avons recherché T whipplei dans les selles et la salive de l’ensemble de la population, comme cela a été fait et signalé en avril . Nous avons également prélevé des échantillons de selles chez des patients ils ont développé une diarrhée Après la collecte, chaque échantillon fécal a été mélangé avec des mL d’éthanol absolu et chaque échantillon de salive avec des mL d’éthano absolu. À l’arrivée, l’ADN a été extrait à l’aide du poste de travail BioRobot MDx Qiagen conformément aux recommandations et aux protocoles du fabricant. Des tests PCR quantitatifs whipplei ont été effectués comme décrit ici. Des échantillons de sang reçus dans notre laboratoire pour des diagnostics de routine ont été prélevés dans un tube EDTA avant l’extraction de l’ADN et négatifs pour le whipplei T. Ils ont été testés par PCR quantitative β-actine comme décrit précédemment. des patients atteints de T whipplei asymptomatique chronique dans les selles précédemment identifiés par notre équipe et suivis pendant des années par l’un de nous DR en consultation ont également été inclus pour les comparaisons Soixante échantillons de sang prélevés dans des tubes EDTA pendant des années de ces patients ont été testés whipplei utilisant la PCR quantitative comme décrit précédemment Statistica l analyse Les données ont été analysées à l’aide du logiciel EpiInfo, version Centres pour le contrôle et la prévention des maladies Les valeurs non paramétriques ont été comparées en utilisant le test χ La signification statistique a été définie en tant que valeurs P & lt; Le test corr corrigé ou le test exact de Fisher a été utilisé lorsque cela a été indiqué

Résultats

Analyse sanguine De décembre à juillet, des échantillons de sang prélevés chez des patients de sexe masculin et féminin ont été analysés et inclus dans cette étude; % étaient des habitants de Dielmo et% étaient des habitants de Ndiop 90% étaient âgés de & lt; années, y compris% qui étaient âgés & lt; Années: Aucun patient n’est décédé pendant l’étude Treize patients Chiffres testés positifs pour T whipplei selon nos critères De plus, l’amplification du gène de la β-actine par PCR quantitative était hautement positive pour tous les échantillons, confirmant la qualité de l’ADN extrait. les cycles ± écart type [SD] des cycles étaient ± pour tous les échantillons de sang prélevés directement pour l’extraction d’ADN au Sénégal et ± – pour les échantillons de sang reçus dans notre laboratoire pour diagnostics de routine et échantillonnés dans un tube EDTA avant extraction d’ADN. n’était pas significatif P = entre ces modes d’échantillonnage

Figure Vue largeDownload slideCarte illustrant l’emplacement du Sénégal et des villages de Dielmo et Ndiop et le nombre d’échantillons positifs pour Tropheryma whipplei dans cette étudeFigure View largeTélécharger une carte illustrant l’emplacement du Sénégal et des villages de Dielmo et Ndiop et le nombre d’échantillons positifs pour Tropheryma whipplei dans cette étude

Figure Vue largeDownload slideRésumé des patients codés AM avec l’ADN de Tropheryma whipplei positif sur le sang en se concentrant sur la saisonnalité de la bactériémie et les données de la réaction en chaîne de la polymérase T whipplei de la salive et des selles effectuées lors du dépistage systématique en avril et un épisode de diarrhée chez les patients en janvier Figure Vue détaillée des patients codés en AM avec l’ADN de Tropheryma whipplei positif sur le sang en se concentrant sur la saisonnalité de la bactériémie et les données de la réaction en chaîne de la polymérase de Whipplei à la dépistage systématique en avril et mais aussi lors d’un épisode de diarrhée chez les patients en janvier La prévalence d’échantillons de T. whipplei-positifs était de% en novembre,% en décembre; % de janvier, de février, de mars,% d’avril, de mai, de juin et de juillet La prévalence était significativement plus élevée chez les enfants de moins de 18 ans. ans de que chez les personnes âgées de; P = La prévalence était également significativement plus élevée dans Dielmo [%] que dans Ndiop [%] de; P = et en décembre et janvier [%] de plus que pendant les autres mois [%] de; Les principales caractéristiques cliniques des patients qui étaient positifs pour T. whipplei sont résumées dans le tableau 5. Les patients étaient des hommes et étaient des femmes. Les patients étaient âgés de plusieurs mois, avec un âge moyen ± ET de ± ans, un âge médian des années, et une gamme interquartile d’années Leurs principales manifestations cliniques étaient la toux rapportée par les patients, les patients souffrant de soif, les patients souffrant de rhinorrhée, les patients fatigués, les patients souffrant de troubles du sommeil et la perte de l’appétit. acétominophène; traitement antibactérien uniquement avec le triméthoprime-sulfaméthoxazole Comparés aux épisodes sans bactériémie à T. whipplei, les troubles de la toux et du sommeil sont significativement plus fréquents chez les patients ayant un ADN de T whipplei dans leur sang P = et P =, respectivement Tableau

Tableau Vue largeTélécharger diapositive Caractéristiques épidémiologiques et cliniques des patients atteints de la bactérie Tropheryma whipplei et résultats du dépistage systématique pour rechercher T whipplei dans les échantillons de selles et de salive, avril Table View largeTélécharger les caractéristiques épidémiologiques et cliniques des patients atteints de la bactérie Tropheryma whipplei et résultats de la Dépistage systématique de la présence de T whipplei dans les échantillons de selles et de salive, avril

Comparaison des principales caractéristiques cliniques des patients présentant une bactériémie à Tropheryma whipplei et des patients sans T whipplei BacteremiaTable View largeTélécharge Comparaison des principales caractéristiques cliniques des patients atteints de la bactérie Tropheryma whipplei et des patients sans T whipplei BacteremiaSix patients présentant de nouveaux épisodes de fièvre Après tous les mois, des tests sanguins ont été effectués sur les patients. Pour le patient, l’ADN de Whipplei n’a été que faiblement détecté dans les tests PCR spécifiques quelques mois plus tard; cependant, des mois plus tard, les deux résultats de PCR étaient négatifs. Aucun des échantillons de sang des patients français qui étaient des porteurs asymptomatiques chroniques de T whipplei n’était positif pour les échantillons de selles et de salive Des échantillons analysés dans cette étude ont également été échantillonnés. Au moment du dépistage systématique au printemps, y compris les hommes et les femmes âgés de mois à ans ± SD, ± ans Les données sont résumées dans le tableau Parmi les patients atteints de bactériémie T whipplei, les échantillons de selles ont été analysés. Résultats positifs de la PCR dans les échantillons de selles Vingt-cinq patients ayant des résultats de T whipplei négatifs dans les prélèvements sanguins avaient un résultat positif au moment du dépistage systématique. Dix-sept provenaient de Dielmo et de Ndiop Cinquante- un des patients ayant des résultats négatifs à la PCR T whipplei dans les échantillons de sang a également eu un résultat négatif à la PCR T whipplei PCR au ti Dans l’ensemble, aucune différence significative n’a été trouvée entre la présence de T whipplei dans les échantillons de selles au moment du dépistage et la bactériémie à T. whipplei. De plus, les patients testés pour la bactériémie à Whipplei Les patients de Ndiop et de Dielmo de Ndiop et de Dielmo qui ont été testés positifs au T whipplei dans leur sang ont également été testés positifs pour T whipplei dans leurs selles, alors que chez Ndiop et chez Dielmo de Cette différence n’était pas significative P = Finalement, les patients ont développé une diarrhée en janvier T De l’ADN de Whipplei a été détecté dans les deux échantillons de selles. Parmi les patients analysés dans cette étude, des échantillons de salive ont été prélevés lors du dépistage systématique en avril, y compris Les données sont résumées dans le tableau Parmi les patients présentant une bactériémie à Whipplei, les échantillons de salive ont été analysés pour les patients de Dielmo Tous les résultats des tests étaient négatifs Deux patients de Ndiop avec sang négatif T whipplei Les résultats de la PCR avaient une salive positive Résultats du test de Whipplei PCR lors du dépistage systématique Quarante-deux patients avec un sang négatif Les résultats de la PCR whipplei avaient également une salive négative Résultat du test whipplei PCR au moment du dépistage systématique Trente et un patients de Dielmo et de Ndiop Aucune corrélation n’a été observée entre l’infection par T whipplei et les résultats de la PCR positive sur la salive T whipplei au moment du dépistage.

Table View largeTableau de téléchargementNombre d’échantillons de salive positifs pour Tropheryma whipplei et nombre testé pour chaque groupe d’âge, tableau de printemps View largeTableau de téléchargementNombre d’échantillons de salive positif pour Tropheryma whipplei et nombre testé pour chaque groupe d’âge, printemps

Discussion

Nous entamons un vaste programme d’identification des agents bactériens responsables de la fièvre dans ces villages concentration. Nous avons déjà identifié des cas de rickettsioses , de fièvre Q et de fièvre récurrente. Données non publiées A notre connaissance, cette étude est la première présence de T whipplei dans les prélèvements sanguins chez des patients présentant une fièvre d’origine incertaine Nous avons détecté l’ADN de T whipplei en% des prélèvements sanguins chez des patients, principalement chez des enfants atteints de fièvre en milieu rural sénégalais. basée sur des procédures et des contrôles expérimentaux stricts, y compris des contrôles rigoureux positifs et négatifs pour valider le test. En outre, chaque résultat positif à la PCR a été confirmé par l’amplification réussie d’une séquence d’ADN additionnelle.Dans une étude précédente, nous avons trouvé% d’enfants asymptomatiques qui vivaient dans le Sénégal rural ont porté T whipplei dans leurs échantillons de selles Ce dépistage a été effectué en Avril Herei n, nous confirmons ces résultats et étendons nos données au transport de T whipplei dans la salive chez les enfants plus âgés et les adultes La prévalence observée chez les individus âgés de plus de ans% est inférieure à celle des individus plus jeunes mais supérieure à celle observée en Europe De plus, c’est la première fois, à notre connaissance, que T whipplei dans la salive a été détecté au Sénégal. La prévalence du transport salivaire de T whipplei% est plus faible que dans les selles, mais elle est encore plus élevée que dans la population générale. Comme dans les études précédentes, les individus ayant un échantillon de salive positif à la PCR contenaient également du Whipplei dans des échantillons de selles Bien qu’une variation saisonnière pour la détection de l’ADN de T whipplei dans des échantillons de sang de les patients avec fièvre d’origine incertaine ne peuvent pas être déterminés, significativement plus de cas ont été diagnostiqués au début de la saison sèche en décembre et janvier P & lt; La prévalence de la bactériémie à T. whipplei était significativement plus élevée chez les villageois de Dielmo que chez ceux de Ndiop. Le paludisme , la fièvre récurrente , la fièvre Q et la fièvre pourprée avaient également des prévalences plus élevées que celles de Ndiop. Les principales manifestations cliniques classiques liées à T whipplei sont l’arthralgie et la diarrhée , mais T whipplei a été rapporté comme impliquant presque tous les organes Notre hypothèse au début de ce travail était qu’une primo-infection entraînant une gastro-entérite et une fièvre peut être associée à une bactériémie. Cependant, nous n’avons pas pu lier la bactériémie à T. whipplei à la diarrhée ni à la présence de T. whipplei dans les échantillons de selles ou de salive. réalisée au printemps, alors que la plupart des cas ont été observés en hiver. Notre travail soulève la question de l’existence d’un lien entre esence d’ADN de Whipplei dans le sang et les manifestations cliniques de l’infection Ici, le principal signe clinique de nos patients était la fièvre associée à la toux T whipplei a été récemment suggérée comme agent de la pneumonie La bactérie a été détectée dans le liquide de lavage bronchoalvéolaire d’un enfant atteint de pneumonie aux États-Unis et en% d’échantillons de liquide de lavage broncho-alvéolaire recueillis chez des patients atteints de pneumonie en unité de soins intensifs en France, y compris le cas de T whipplei seule bactérie détectée Ces données globales soulèvent le rôle de T whipplei dans la genèse des maladies respiratoires sans atteinte digestive Il est actuellement difficile de localiser cette bactériémie dans le cycle naturel de l’infection à T. whipplei Nous proposons plusieurs hypothèses

Figure Vue largeTélécharger la diapositive d’un cycle naturel pour Tropheryma whipplei Tw, y compris Tw bacteremiaFigure View largeDownload slideProposition d’un cycle naturel pour Tropheryma whipplei Tw, y compris Tw bacteremiaNous n’avons pas testé les sujets témoins afébriles du Sénégal, mais la présence de T whipplei ADN dans les échantillons sanguins Dans une autre étude, des échantillons sanguins testés par T whipplei PCR chez des patients avec un diagnostic exclu d’infection à T. whipplei, aucun n’a été positif On peut penser que asymptomatique T whipplei bactériémie est plus fréquente dans le Sénégal rural, où la bactérie est si commune Cette hypothèse devrait être abordée à l’avenir parce que le manque de spécimens sanguins provenant d’individus asymptomatiques dans Dielmo et Ndiop est la principale limite de notre étude Cependant, le manque de La bactériémie détectée chez des patients français atteints de T whipplei chronique va à l’encontre de cette théorie. Les premiers résultats suggèrent que T whipplei peut être associé à de nombreuses infections non diagnostiquées avec toux. Nous supposons que la distribution de T whipplei est répandue et que la bactérie est un agent de subtilité, en grande partie manifestations cliniques sous-estimées, y compris les infections respiratoires

Remerciements

Nous remercions le Crédit Ministériel «Programme Hospitalier de Recherche Clinique» Recherche de Tropheryma whipplei comme agent de gastroentérite chez le jeune enfant Soutien financier Crédit Ministériel «Programme Hospitalier de Recherche Clinique» Conflits d’intérêts potentiels Tous les auteurs: pas de conflits