Une analyse multicentrique internationale de la performance des tests de charge par cytomégalovirus

Contexte La quantification de la charge de cytomégalovirus CMV est centrale dans la prise en charge des infections à CMV chez les patients immunodéprimés, mais les résultats quantitatifs diffèrent actuellement significativement entre les méthodes et les laboratoires.Méthodes Le test COBAS AmpliPrep / COBAS TaqMan CMV Test CAP / CTM CMV, développé en utilisant le CMV standard dans le processus d’étalonnage, a été comparé aux dosages locaux utilisés par les laboratoires des centres de transplantation aux États-Unis et en Europe Panneaux de plasma aveugles n = dopés avec – copies log / mL et échantillons plasmatiques cliniques de patients immunodéprimés n = ont été testés Le pourcentage de CI dans les copies log / mL des données combinées par membre du panel pour le test CMV CAP / CTM comparé aux dosages de comparaison était vs à des copies de journal / mL; vs à des copies de journal / mL; vs à des copies de journal / mL; vs à des copies de journal / mL; vs à des copies de journal / mL; Dans les échantillons cliniques, des différences constantes et variables de quantification entre le test CMV CAP / CTM et les tests comparateurs ont été observées. Conclusions Un accord interlaboratoire élevé et la précision des résultats des tests CMV CAP / CTM dans différents laboratoires sur des ordres de grandeur suggèrent que le test pourrait être utile dans des études prospectives identifiant les seuils de charge virale clinique pour le traitement du CMV

CMV, charge virale, PCR, transplantation, standardisationVoir le commentaire éditorial de Caliendo sur les pages -Human cytomégalovirus CMV infection provoque une morbidité et une mortalité significatives dans la période post-transplantation à la fois des transplantations d’organes SOT et des greffes de cellules souches hématopoïétiques. Les transplantations de donneurs séropositifs sont infectées par le CMV transmis par l’organe transplanté ou par inadvertance par des produits sanguins CMV-positifs Chez les receveurs séropositifs au CMV, la réactivation du CMV latent survient lorsque le contrôle immunitaire spécifique du CMV est altéré par les immunosuppresseurs et les lymphocytes T Le diagnostic de la réplication CMV et de la maladie chez les receveurs SOT et HSCT peut être fait en utilisant différentes méthodes de laboratoire, y compris l’histologie, l’antigénémie PP, ou l’ADN du CMV par dosage quantitatif des acides nucléiques QNAT les échantillons de tissus sont généralement lents et ne sont pas quantitatifs L’antigène pp Le test emia est un délai rapide mais moins sensible que QNAT et souvent difficile à réaliser chez les patients sévèrement neutropéniques CMV QNAT, basé le plus souvent sur la réaction en chaîne par polymérase PCR, a largement remplacé les méthodes conventionnelles grâce à une meilleure performance globale, et les directives cliniques recommandent maintenant l’utilisation de ces dosages pour la surveillance de la charge en CMV chez les receveurs SOT et HSCT pour prévenir ou gérer la réplication et la maladie du CMV [,,,] Un problème central apparu avec l’utilisation de différents tests PCR CMV Cette variabilité de la quantification inter-essais, démontrée dans des études multicentriques avec des panels normalisés Cette absence d’accord complique la prise en charge de patients individuels pouvant subir des tests dans différents laboratoires et a entravé l’établissement de valeurs seuils quantitatives largement applicables dans la prise de décision clinique, ayant potentiellement un impact négatif sur la gestion et les résultats à long terme Par conséquent, dans la prise en charge clinique du CMV après la transplantation, il existe un important besoin médical non satisfait pour le développement de tests d’acides nucléiques normalisés qui fournissent des données quantitatives comparables dans différents laboratoires. La norme internationale CMV QNAT a récemment été établie par le Comité OMS d’experts de la standardisation biologique. Cette norme CMV devrait aider à améliorer l’accord inter-essai. Cependant, la variabilité spécifique au dosage est encore attendue en raison des différences sous-jacentes dans les constituants du test. Comme suggéré récemment , ces disparités de quantification résiduelle pourraient être résolues grâce à la disponibilité généralisée de tests de PCR commerciaux qui englobent toutes les étapes du dosage de la préparation d’acide nucléique, ré Nous présentons ici les résultats d’une étude internationale multicentrique visant à déterminer la comparabilité des données quantitatives et la précision d’un nouveau système entièrement automatisé d’analyse des aliments. [Test CAP / CTM CMV] en utilisant un panel aveugle dans divers laboratoires et pour comparer ces paramètres entre les différents dosages actuellement utilisés dans ces laboratoires Accord entre le test CAP / CTM CMV et le test CMV QNAT COBAS AmpliPrep / COBAS. les divers essais de quantification internes ont également été définis en utilisant des échantillons de plasma clinique provenant d’individus immunodéprimés

Méthodes

PAC / CTM Colinéarité du test CMV à la première norme internationale CMV de l’OMS

Le test CAP / CTM CMV Roche Molecular Systems, Inc [RMS], Branchburg, New Jersey caractéristiques de performance analytique, y compris la traçabilité à la première norme internationale OMS CMV pour les techniques d’amplification d’acide nucléique NIBSC / ont été décrites précédemment En bref, la PAC / Le test CTM CMV utilise des amorces et des sondes ciblant une région conservée du génome du CMV UL, ADN polymérase codée par le virus et a une gamme de quantification linéaire de to – log copies / mL représentant et – log IU / mL, respectivement copy = IU Plusieurs normes et contrôle des échantillons ont été utilisés pendant la mise au point de l’épreuve pour assurer la traçabilité de la première norme internationale CMV de l’OMS recommandée par les directives de l’Institut de normes cliniques et de laboratoire Les normes comprenaient la norme OMS CMV, la norme secondaire CMV RMS, la norme RMS CMV CMV souche AD, et RMS CMV panneau d’étalonnage Lambda CMA Les normes, le panneau d’étalonnage, et un CMV indépendant clin L’évaluation de la colinéarité a été réalisée pour démontrer que la norme OMS était commutable à n’importe quel titre dans toute la gamme de mesure et assurer ainsi la traçabilité. Le standard CMV de l’OMS était de UI / mL à UI / mL – log UI / mL, le matériau de source standard secondaire RMS CMV a été testé de UI / mL à millions UI / mL – log UI / mL, le panel d’étalonnage RMS CMV a été testé Le spécimen clinique indépendant du CMV a été testé de UI / mL à UI / mL – log UI / mL. Les échantillons standard et de contrôle ont été démontrés comme distribués colinéairement au matériel de l’OMS à travers le linéaire. gamme du test CAP / CTM CMV Figure supplémentaire

Tests de quantification de l’ADN du CMV

La quantification de l’ADN du CMV avec le test CAP / CTM CMV a été comparée aux tests internes enregistrés dans chacun des centres académiques incluant le site de l’hôpital John Hopkins, PCR en temps réel basé sur les réactifs Artus [Qiagen, Germantown, Maryland], Hospital Universitario de site de la Princesa, test PCR en temps réel Affigene [Cepheid, Sunnyvale, Californie] site de l’Université de Bâle, PCR en temps réel définie par l’utilisateur [cible du gène ULa], site de Stanford University, test CMV COBAS AMPLICOR MONITOR [RMS] et Helsinki Site de l’hôpital universitaire, PCR en temps réel définie par l’utilisateur [cible du gène pp] Les caractéristiques de performance analytique pour les tests PCR quantitatifs commerciaux et en laboratoire ont été décrites précédemment

Comparabilité et reproductibilité du test CMV CAP / CTM et des tests PCR quantitatifs

Comparabilité et reproductibilité du test CAP / CTM CMV a été étudié en comparaison avec des tests basés sur des réactifs commerciaux, et des tests qui utilisent des amorces et des sondes développées en laboratoire en utilisant un panel préparé à partir d’une souche de par le test COBAS AMPLICOR CMV MONITOR Le panel était constitué de dilutions; ,,,,, et copies / mL,,,, et log copies / mL, respectivement Ces dilutions couvraient la plage dynamique du test CAP / CTM CMV et représentent les seuils de charge virale clinique pertinents [-,] Les dilutions de stock de virus préparées ont été ensuite dilués dans du plasma d’acide éthylènediaminetétraacétique humain à CMV négatif. Chaque site a testé des réplicats de chaque membre du panel avec des tests CMV CAP / CTM et des tests internes à l’exception des réplicats de site par CAP / CTM CMV / réplicats du test interne. à RMS et expédiés aux sites d’étude étiquetés avec des numéros d’identification codés pour s’assurer que le personnel de l’étude du site était aveugle à la concentration d’ADN du CMV de chaque membre du panel. Ces expériences ont été conçues conformément aux directives pour établir les performances analytiques des QNAT.

Accord quantitatif entre le test CMV CAP / CTM et les tests PCR quantitatifs utilisant des échantillons cliniques provenant de patients immunodéprimés

L’accord entre le test CAP / CTM CMV et les tests PCR quantitatifs décrits ci-dessus a été étudié avec des échantillons de plasma prélevés sur les sites d’étude de patients immunodéprimés surveillés pour la réplication du CMV et la maladie. Les échantillons ont été testés uniquement sur le site. Les bénéficiaires participant à la prophylaxie au maribavir pour la prévention de l’essai de phase CMV NCT ont été fournis par ViroPharma, Inc, aux sites d’étude pour le test PCR Seuls les patients ayant des échantillons de plasma avec un volume & gt; En raison du volume requis pour les essais internes, le site n’a pas quantifié les échantillons de l’essai de prophylaxie au maribavir. Les échantillons de plasma de l’essai de prévention du maribavir ont été distribués aléatoirement aux autres sites d’étude. chaque institution pour cette étude

Analyses statistiques

La précision des résultats de test valables log-transformés dans la fourchette linéaire de chaque essai a été estimée à chaque concentration attendue d’ADN CMV logarithmique. La moyenne log-normale et le coefficient de variation log-normal% et% intervalles de confiance incluant les limites de confiance inférieure et supérieure pour la variance totale ont été calculés en utilisant le modèle d’effets mixtes linéaires avec site et jour / run, et intra-run comme effets aléatoires. L’analyse de régression de la charge virale pour chaque test local par rapport au test CAP / CTM CMV a été réalisée pour évaluer la corrélation entre les dosages globaux et par site d’étude Toutes les analyses statistiques ont été réalisées à l’aide du logiciel statistique SAS version

RÉSULTATS

Comparabilité et reproductibilité des tests PCR quantitatifs avec un panel d’ADN CMV standardisé

Pour déterminer la comparabilité des données quantitatives obtenues avec le test CAP / CTM CMV dans les laboratoires par rapport aux tests PCR des centres participants, des panels de plasma dopés avec CMV AD-from-log copies / mL ont été testés sur les sites d’étude. le test CAP / CTM CMV dans les différents laboratoires comme démontré par une plus petite gamme de concentrations moyennes de membres du panel par site et IC plus étroits des données combinées par membre du panel par rapport au test PCR interne en usage clinique sur les sites d’étude. CAP / CTM CMV, la plus grande variabilité quantitative a été observée pour les copies de log de membre du panel de concentration les plus faibles / mL, la limite inférieure de quantification du test; tous les réplicats ont été détectés, mais /% n’a pas pu être quantifié. Ce membre du panel a également été détecté de manière variable par chaque PCR de comparaison. Le site de test AMPLICOR n’a pas détecté / réplique%, alors que le site test Affigene CMV a pu quantifier / répliquer. des résultats du test de PCR de comparateur valides, les réplicats n’ont pas été détectés, étaient inférieurs à la limite inférieure de quantification et% ont été quantifiés Tableau supplémentaire

Figure Vue largeDownload slideComparabilité des données quantitatives à travers les sites de laboratoire Une série de dilutions de cytomégalovirus CMV AD- a été préparée en utilisant cytomegalovirus-plasma séronégatif Des moyens géométriques de réplicats testés sont tracés Les intervalles numériques indiquent% intervalles de confiance des moyennes de chaque membre du panel à chaque site A, Données COBAS AmpliPrep / COBAS Données TaqMan CMV La ligne pointillée indique la limite inférieure de dosage de la quantification B, Données provenant des tests de réaction en chaîne par polymérase de comparaison Abréviations: CAP / CTM CMV, test COBAS AmpliPrep / COBAS TaqMan CMV; CMV, cytomegalovirusFigure View largeTélécharger la diapositiveComparabilité des données quantitatives sur les sites de laboratoire Une série de dilutions de cytomégalovirus CMV AD- a été préparée en utilisant un plasma cytomégalovirus-séronégatif Les moyennes géométriques des réplicats testés sont tracées Les intervalles numériques indiquent les% d’intervalles de confiance des moyennes de chaque membre du panel sur chaque site A, COBAS AmpliPrep / COBAS Données TaqMan CMV La ligne pointillée indique la limite inférieure de dosage de la quantification B, Données provenant des tests de réaction en chaîne par polymérase de référence Abréviations: CAP / CTM CMV, COBAS AmpliPrep / COBAS Test TaqMan CMV; CMV, cytomégalovirus Les données provenant d’expériences avec le plasma dopé ont également été utilisées pour comparer la précision du test CAP / CTM CMV aux tests PCR internes utilisés par les sites d’étude. L’écart-type était & lt; log copies / mL pour la plupart des membres du panel sur les différents sites effectuant le test CAP / CTM CMV, avec des exceptions et des copies log / mL pour les tests site et site, respectivement, Figure reproductibilité similaire pour le site d’essai AMPLICOR, CMV en temps réel PCR ULa PCR, site et PCR en temps réel pp PCR, tests internes du site Le site PCR Artus CMV et les tests de tranchant du site Affigene CMV ont démontré des écarts-types d’imprécision plus élevés & gt; log copies / mL pour plusieurs membres du panel Coefficients de variation ont démontré des tendances similaires Figure supplémentaire

Figure Vue large Diapositive de téléchargementRéproductibilité des données quantitatives dans les sites de laboratoire Les écarts types des réplicats des séries de cytomégalovirus CMV AD-dilution sont indiqués A, COBAS AmpliPrep / COBAS TaqMan CMV Précision du test par site d’étude Répétitions quantifiables aux copies log / mL: site, n =; site, n =; site, n =; site, n =; site, n = Écarts-types à des copies log / mL n’ont pas été calculés pour les sites et Aux copies de journal / mL, toutes les répétitions étaient quantifiables sur tous les sites excepté B / site quantifiable, Précision pour les tests de réaction en chaîne par polymérase de comparaison. au site, n =; à des sites -, n = Répliques quantifiables à des copies de journal / mL: site, n =; site, n =; site, n =; site, n =; site, n = Ecart-type aux copies log / mL n’a pas été calculé pour le site Aux copies log / mL, toutes les répétitions étaient quantifiables sur tous les sites sauf site / quantifiable et site / quantifiable Abréviation: CAP / CTM CMV, COBAS AmpliPrep / COBAS TaqMan CMV TestFigure View largeDownload slideReproductibilité des données quantitatives à travers les sites de laboratoire Les écarts-types des réplicats des cytomégalovirus CMV AD-dilution series sont représentés A, COBAS AmpliPrep / COBAS TaqMan CMV Précision du test par site d’étude Répétitions quantifiables aux copies log / mL: site, n =; site, n =; site, n =; site, n =; site, n = Écarts-types à des copies log / mL n’ont pas été calculés pour les sites et Aux copies de journal / mL, toutes les répétitions étaient quantifiables sur tous les sites excepté B / site quantifiable, Précision pour les tests de réaction en chaîne par polymérase de comparaison. au site, n =; à des sites -, n = Répliques quantifiables à des copies de journal / mL: site, n =; site, n =; site, n =; site, n =; site, n = Ecart-type aux copies log / mL n’a pas été calculé pour le site Aux copies log / mL, toutes les répétitions étaient quantifiables sur tous les sites sauf site / quantifiable et site / quantifiable Abréviation: CAP / CTM CMV, COBAS AmpliPrep / COBAS TaqMan CMV Tester

Accord quantitatif entre le test CMV CAP / CTM et les tests PCR quantitatifs utilisant des échantillons cliniques provenant de patients immunodéprimés

Les tendances du désaccord quantitatif entre le test CMV CAP / CTM et les tests PCR des sites d’étude ont été définies en comparant les charges virales obtenues par les tests sur des échantillons plasmatiques individuels de patients immunodéprimés chez des patients HSCT constitués de% / des patients étudiés; Figure 2. Des modèles de disparité ont été observés. Le test CAP / CTM CMV a donné des valeurs plus faibles que les sites d’essais internes, et dans toute la plage de mesure. L’analyse d’Altman a démontré que cette pente de régression constante des moindres carrés est la valeur absolue & lt ;, avec une valeur P non significative. De plus, pour les essais internes aux sites et, la différence de quantification par rapport au test CMV / CTM varie dans toute la gamme de mesure. l’analyse a également démontré que cette pente proportionnelle de la régression par les moindres carrés de la pente de régression est la valeur absolue & gt ;, avec une valeur P significative, Figure

Tableau Population des patients et nombre d’échantillons utilisés dans la comparaison de reproductibilité du test COBAS AmpliPrep / COBAS TaqMan CMV et des dosages quantitatifs de la réaction en chaîne de la polymérase Population totale Nbre d’échantillons testés Nbre de résultats de test valides a Récipiendaires de greffe d’organe n = receveurs de greffe de cellules souches hématopoïétiques n = Patients infectés par le VIH n = Autres patients immunodéprimés n = b Patients Population Nombre d’échantillons testés Nombre de résultats de tests valides a Récipiendaires de greffe d’organes pleins n = receveurs de greffe de cellules souches hématopoïétiques n = patients infectés par le VIH n = autres patients immunodéprimés n = b Abréviation: VIH, virus de l’immunodéficience humainea Seuls les échantillons présentant des résultats appariés dans la fourchette linéaire des tests de réaction en chaîne de la polymérase ont été inclus dans l’analyse de comparaisonb Autres patients immunodéprimés incluaient des sujets diagnostiqués avec des malignités hématologiques n = ou maladies autoimmunes n = receivi ng traitement immunosuppresseurVoir Grand

Figure View largeTélécharger la lame dans le cytomegalovirus CMV Mesure de la charge ADN entre le COBAS AmpliPrep / COBAS TaqMan CMV Test CAP / CTM CMV et réaction en chaîne par polymérase de comparaison Tests PCR dans des échantillons de plasma provenant d’individus immunodéprimés Tableaux de gauche, graphiques d’accord avec lignes de régression Deming; ligne en pointillés indique% niveau d’accord Panneaux de droite, Bland-Altman trace la différence de quantification entre le test CMV CAP / CTM et le dosage PCR comparatif vs moyenne des mesures Ligne continue, régression par les moindres carrés; lignes pointillées, différences moyennes de // – log copies / ml Abréviation: CAP / CTM CMV, COBAS AmpliPrep / COBAS TaqMan CMV TestFigure Voir grandDownloading slide in cytomégalovirus CMV Mesure de charge d’ADN entre le COBAS AmpliPrep / COBAS TaqMan CMV Test CAP / CTM CMV et réaction en chaîne par polymérase de comparaison Dosages par PCR dans des échantillons de plasma provenant d’individus immunocompromis Panneaux de gauche, graphiques d’accord avec des droites de régression de Deming; ligne en pointillés indique% niveau d’accord Panneaux de droite, Bland-Altman trace la différence de quantification entre le test CMV CAP / CTM et le dosage PCR comparatif vs moyenne des mesures Ligne continue, régression par les moindres carrés; lignes pointillées, différences moyennes de // – log copies / ml Abréviation: CAP / CTM CMV, COBAS AmpliPrep / COBAS Test TaqMan CMV

DISCUSSION

reflète en tout cas l’utilisation de différents calibrateurs dans des tests qui sont par ailleurs fonctionnellement similaires Dans ces cas, l’accord inter-essai peut s’améliorer avec l’adoption d’un calibrateur basé sur la norme internationale; alternativement, un facteur de conversion peut être appliqué pour normaliser les données si l’utilisation d’un autre calibrateur n’est pas réalisable. Ces ajustements relativement faciles n’amélioreront probablement pas l’accord entre des tests dont la fonctionnalité est suffisamment différente pour entraîner des différences de quantification variables dans toute la gamme de mesure. Avec une quantification variable, la traçabilité du test par rapport à la norme internationale seule ne corrigera pas adéquatement ces types de différences. Au lieu de cela, ces essais doivent également démontrer une colinéarité à la norme internationale dans toute la gamme de mesure du dosage. La première norme internationale CMV de l’OMS doit être utilisée chaque fois que des échantillons sont évalués chez des patients suivis pour l’ADN du CMV dans le cadre de la prise en charge des receveurs SOT et HSCT.L’analyse de l’ADN du CMV est devenue critique pour l’identification précoce de la réplication virale. Dans la SOT, les approches de prophylaxie universelle et de traitement préventif sont toutes deux utilisées pour prévenir la maladie à CMV [,,,] Bien que les deux approches soient actuellement considérées comme Les avantages de la prophylaxie sont la prévention de la réplication et de la maladie dans la période posttransplantation immédiate et l’élimination du besoin de surveillance de la charge virale pendant la prophylaxie, en particulier chez le receveur CMV séropositif à risque élevé / séronégatif pour le CMV. l’administration prolongée de médicaments antiviraux a limité l’utilité de cette approche chez certains patients. La surveillance de la charge virale peut également être utile chez certains patients chez lesquels on soupçonne l’émergence de virus pharmacorésistants lorsqu’ils sont traités avec des doses antivirales plus faibles. effets Enfin, l’apparition de la maladie à CMV tardive a été observée jusqu’à un pourcentage de SO Dans cette approche alternative, la thérapie antivirale est initiée avant l’apparition de la maladie à CMV lorsque les mesures de charge virale atteignent un seuil prédictif. Les avantages du traitement préemptif comprennent une plus petite proportion de patients. Suppression de la moelle osseuse est la raison majeure de l’utilisation de stratégies préemptives dans la HSCT allogénique dans la période pré-ouvrable Inconvénients de la préemptive de patients traités, raccourcit la durée thérapeutique, réduit les coûts associés aux médicaments post-transplantation, et réduit la fréquence de la toxicité médicamenteuse stratégie antivirale comprennent le risque de maladie avant l’initiation du traitement chez les individus à réplication rapide, les effets indirects de la réplication du CMV en l’absence de maladie sur la survie et la mortalité des allogreffes et les coûts de laboratoire en raison d’une surveillance plus fréquente de la charge virale. cette approche est l’absence de seuils quantitatifs généralement établis qui prédisent la maladie CMV chez les receveurs de différentes allogreffes en grande partie à l’absence de tests de quantification standardisés qui fonctionnent de manière comparable dans les laboratoires. Le manque de tests de charge CMV normalisés a également compliqué la gestion du CMV dans d’autres Pour les patients individuels, les disparités de quantification entre les laboratoires exigent qu’un seul laboratoire soit utilisé pour les tests de charge virale, afin que les résultats puissent être interprétés avec précision. Patients HSCT [,,], le manque de normalisation a entravé le développement de prédicteurs quantitatifs discrets, applicables à l’échelle mondiale, de la maladie active, et d’autres seuils qui peuvent être utilisés pour déterminer le risque de rechute et la durée du traitement adéquat. ces seuils sont placés sur des laboratoires individuels, et en tant que résultat, les valeurs cliniquement pertinentes varient encore d’un centre à l’autre La mise en œuvre d’une norme internationale et la disponibilité de QNAT commerciaux avec un large accord interlaboratoire traçables et colinéaires à la première norme internationale CMV de l’OMS représentent un progrès nécessaire. CTM CMV, des résultats précis, précis et standardisés devraient permettre la conception d’études multicentriques pour délimiter les algorithmes de test, y compris les seuils quantitatifs et les fréquences de test qui améliorent les résultats cliniques des infections à CMV chez les patients HSCT et SOT À leur tour, ces données peuvent être utilisées comme base pour les directives de gestion qui devraient clarifier de manière significative la prise de décision pour les cliniciens et améliorer les résultats de l’infection chez les patients à risque

Remarques

Remerciements Les auteurs remercient le Dr Stephen Villano de ViroPharma, Inc, pour avoir fourni des échantillons de patients dans le cadre de l’essai de phase du marabivir NCT; Michael Forman à l’hôpital Johns Hopkins; Dr Alexis Dumoulin et les techniciens de l’Abteilung Infektionsdiagnostik, Université de Bâle; Le Dr Laura Mannonen, le Dr Raisa Loginov, le Dr Ilkka Helanterä et les techniciens de l’Hôpital universitaire d’Helsinki; Elisea Lomas à l’Hôpital Universitaire de la Princesa; et Dr Tri Do et Ula Cowen de Roche Molecular Systems, Inc, pour l’assistance fournie dans la préparation de l’étude. Soutien financier Ce travail a été soutenu par Roche Molecular Systems, Inc, Pleasanton, Californie Conflits d’intérêts potentiels HH H a reçu des honoraires de Roche Diagnostics; S A et B C sont des employés de Roche Molecular Systems, Inc; R A V était un employé de Roche Molecular Systems, Inc; AV a été membre du conseil consultatif scientifique de Roche Diagnostics, consultant pour Qiagen et a reçu un financement pour les essais cliniques de Roche Molecular Systems et Qiagen. Tous les autres auteurs ne signalent aucun conflit potentiel Tous les auteurs ont soumis le formulaire ICMJE pour la divulgation des conflits potentiels d’intérêt Les conflits que les éditeurs jugent pertinents pour le contenu du manuscrit ont été divulgués